无锡市疾病预防控制中心拟采购磷酸化修饰定量蛋白组学检测外包服务，现欢迎符合相关条件的供应商积极报名响应。

　　一、采购项目：

　　项目名称：磷酸化修饰定量蛋白组学检测外包服务      

　　项目编号：WXJKYB2024015                       

　　二、采购内容及要求：

　　1. 本项目采用磷酸化 TMT 定量蛋白质组学检测。

　　2.操作步骤要求：提取样品中的总蛋白并酶解为多肽，多肽 N-term 以及末端 Lysine 侧链基团的游离氨基能够与 TMT 标签进行共价结合，从而使每条多肽都带上至少一个 TMT 标签；不同 TMT 标签具有相同的分子量，但是却有不同的同位素分布，来自不同样品的相同多肽在 MS1 中同时被分离，经裂解后在 MS2 中释放出 reporter，代表该多肽在对应样品中的相对含量。TMT (iTRAQ)最高可同时标记 16 (8) 组不同的生物样品，且一次性完成全部样品的定性定量分析，显著的提高了实验通量，降低了定量误差，可发现更细微的生物学差异。为了获得比较组中差异表达的磷酸化修饰蛋白，本项目采用磷酸化 TMT 标记定量蛋白组技术开展研究。

　　3.样本需经过：提取、BCA定量、还原、烷基化、Trypsin蛋白酶解、多肽脱盐、TMT标记、多肽脱盐、色谱分级、High–pH分级、磷酸肽富集、质谱检测、数据分析。

　　4.其中TMT标记需要采用thermo公司试剂盒进行操作，多肽样本需经反相UPLC在碱性条件下分成多个组分，不少于四个，质谱分析要求：质谱分析使用数据依赖性采集 (DDA) 模式，总分析时长为 90 min，采取正离子检测模式。一级扫描 (Full scan) 范围 350-1600 m/z，分辨率为 120k(@ 200 m/z)，AGC 为 3E6，最大离子注入时间(max IT) 为 50 ms；一级扫描中强度最高的 20 个离子 (top 20) 经四极杆筛选后使用 HCD 裂解后进行碎片离子扫描。四极杆隔离窗口 (isolation window) 为0.7 m/z，标准化碰撞能 (NCE) 为 36%，AGC 为 5E4，max IT 为 100ms。二级扫描固定最小 m/z 为 110 (fixed first mass)，分辨率 45k。根据色谱峰峰宽，动态排除时间设为30s；单电荷及 >6 价的离子不进行二级扫描。质控样中蛋白定量的变异系数 Cv <10%，标记效率： N 端＞95% K 端>99%，蛋白鉴定量：不低于8000。

　　5.数据分析：原始数据应使用Proteome Discoverer 软件 (version 2.4.0.305）进行搜库分析，多肽鉴定通过内置的 Sequest HT 搜库引擎完成。基于质谱检测得到的 Raw 文件，进行对应数据库的搜索，然后基于数据库搜索的结 果进行蛋白质鉴定，同时进行肽段、蛋白和母离子质量容差分布分析来评定质谱检测数据的质量。

　　6.对鉴定到的蛋白进行常见功能数据库注释，包括 COG数据库、GO数据库和KEGG数据库；接下来进行蛋白质的定量分析，包括鉴定到的蛋白质总体差异分析和差 异 蛋白的筛选及表达模式聚类分析。

　　7.最后针对筛选出来的差异蛋白进行 GO、KEGG功能富集分析和互作网络分析等一系列的差异蛋白功能分析。

　　8.数据库要求：NCBInr数据库、UniProt数据库、BioGRID数据库、Database of Interacting Proteins数据库、MINT数据库等。

　　9.数据报告：交付数据的 QC 、分析报告及导出的图表数据、质谱的原始数据文件。

　　10.成果交付后，乙方提供免费的项目咨询服务。如因乙方原因导致项目失败、服务或产品质量不合格等，乙方承担全部责任并退还已付款。

　　11.项目周期：1个月，原始数据保存期限：12个月。

　　本项目最高限价为：7.2万元。

　　供应商资质要求：无

　　三、报价人资格要求：

　　参加本次采购活动除应当符合《中华人民共和国政府采购法》第二十二条的规定外，还必须具备以下条件：

　　1、经国家工商行政管理机关注册并经国、地税登记的法人单位，有能力独立完成招标项目要求的技术及服务，且具有良好的财务状况和商业信誉，营业执照复印件、法人身份证复印件、授权书、登记人身份证原件；

　　2、投标人如为被授权人，需提供投标单位为其连续3个月缴纳社保证明（不含投标当月），投标人如为公司法定代表人，无需提供社保证明；

　　3、无违反法律、行政法规规定的其他条件；

　　4、本次招标不接受联合体投标；

　　5、报价人须是具有相关资质要求的合格供应商。

　　四、报名时间、地点及联系事项

　　1、响应时间：2024年5月17日至2024年5月23日，每天上午9：00至11:30，下午14：00至16:30（节假日除外）。

　　2、响应地址：无锡市金城路499号无锡市疾病预防控制中心；联系人：冯老师；联系电话：15052125629。

　　3、投标人将所需资格证明文件（营业执照及法人身份证复印件）加盖公章以电子文件形式发送至我中心邮箱：wxcdchqbzkyb@163.com。报名邮件以“公司名称全称+投标项目及编号”形式命名主题，并在邮箱正文处留注联系人及联系方式，否则不予审核。

　　4.审核结果，将通过报名邮箱告知，报名审核通过者将在报名邮箱中收到响应文件电子版。邮箱报名且通过审核后方可参与谈判，响应文件请密封后于开标当日由投标人携带至竞标现场。

　　五、成交方式：

　　按二次报价总价最低者中标的原则确定成交价格和供应商。

　　六、招标有关信息

　　谈判时间：2024年5月24日9:30。响应人须按要求按时携带法人身份证原件或授权委托人身份证原件及授权委托书、响应文件（密封并加盖公章）到达指定地点（无锡市疾病预防控制中心4楼1425招标评标室）等候参加谈判，如未能按时参加谈判，则视为自动放弃本次采购活动。

　　有关本次采购活动方面的问题,可来电咨询。

　　                                                                                                                                         无锡市疾病预防控制中心

　　                                                                                                                                               2024年5月16日